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左亚叶酸钙主要用于肿瘤化疗的辅助治疗，如与甲氨蝶呤结合用作解救疗法，以对抗肿瘤细胞抗药性，并降低对正常细胞的毒性；与5-FU合用可延长晚期结肠癌和直肠癌患者的生存时间。用法是左亚叶酸钙100毫克加生理盐水100毫升静脉点滴后，给予五氟尿嘧啶375-425毫克每平方米静脉点滴4-6小时。